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分析毛細管電泳儀的進樣操作事項

更新時間:2021-08-26      點擊次數(shù):1591
   毛細管電泳儀是以毛細管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進行分離,是分析科學繼液相色譜儀之后的又一重大進展,使分析科學從微升級進入到了納升級水平,不僅使單細胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機。
  毛細管電泳儀分析對進樣技術(shù)要求很高,進樣操作事項如下。
  一、進樣區(qū)帶越小越好:
  無論采用何種進樣方式,毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長度,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。
  二、進樣時間以短為宜:
  通常進樣時間,此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。
  雖然毛細管電泳的進樣時間可,但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液,進樣時間過短會影響分析的重復性。
  三、樣品預濃縮:
  受毛細管內(nèi)總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大進樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來改善。
  1、當樣品緩沖液的電導明顯低于電泳緩沖液時,毛細管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場,使樣品溶液中的分子遷移的更快。當這些分子到達電泳緩沖液邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢,使樣品區(qū)帶由寬變窄,濃度提高,而達到濃縮的目的。
  2、當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導一樣,而樣品濃度較稀,不適合再作稀釋時,可在進樣前先吸入一些水,也能達到濃縮的目的。
  無論采取何種進樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降,會導致此區(qū)帶溫度升高。
  四、毛細管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始進樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
  五、電極不要和毛細管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。
  六、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進樣量的恒定。
  七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強度應(yīng)低于后者。
  八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。
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